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細胞培養技術注意事項

點擊次數:804 更新時間:2024-03-27

細胞培養技術注意事項大匯總:

 

1. 實驗進行前,無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,以70 %ethanol 擦拭無菌操作抬面,并開啟無菌操作臺風扇運轉10 分鐘后,才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株,且即使培養基相同亦不共享培養基,以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10 分鐘以上后,再進行下一個細胞株之操作。

 

2. 無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置,其它實驗用品用完即應移出,以利于氣流之流通。實驗用品以 70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在抬面之中央無菌區域,勿在邊緣之非無菌區域操作。

 

3. 小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45° 角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

 

4. 工作人員應注意自身之安全,須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染之細胞株應特別小心操作,并選擇適當等級之無菌操作臺(至少 Class II)。操作過程中,應避免引起aerosol 之產生,小心毒性藥品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖銳針頭之傷害等。

 

5. 定期檢測下列項目: 5.1. CO2 鋼瓶之CO2壓力 5.2. CO2 培養箱之CO2濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,每周更換)。 5.3. 無菌操作臺內之airflow 壓力,定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜,預濾網(300小時/預濾網,3000 小時/HEPA)。

 

6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750),定期更換水槽的水。

 

7. 認真按照操作規程進行實驗,一般不大會導致污染,很多情況下是由于所用的試劑或培養基有污染而使實驗失敗。

 

8. 粉末培養基配制好后(加了血清),一般在4度盡量不要超過1個月,如在-20度存放時間可長一些,但最好也不要超過3-4個月,可能對于永生化細胞株來說要求不是太高,但我在過去的4年里一直是作原代 細胞培養 的,細胞嬌弱,經驗表明放置時間不宜過長。

9. 關于實驗用品的清洗與消毒,我的經驗是:用過的玻璃器皿先在清水中浸泡30min以上,然后加少許清洗劑,以超聲波洗滌30min左右,(如無超聲波洗滌器可用軟毛刷輕輕刷洗干凈),撈出晾干,再在鉻酸洗液中浸泡6-18h(或過夜)后,自來水清洗10-15遍,雙蒸水清洗3-4遍,晾干,高壓消毒后即可使用。

10. 許多塑料制品也可以高壓消毒,例如培養瓶蓋,膠塞,吸頭等。不能用于高壓的一般均已制成一次性作用的商品了,當然如果 money有限,如進口的培養板、皿等,也可以重復使用1-2次,我當時使用方法是將其清潔后,使用前在紫外燈下敞開照射1-1.5h即可,我做過多次,沒有出現問題。塑料培養瓶由于清洗消毒不便,最好不要重復使用,如一定要重復用,可用環氧乙烷等消毒,(消毒后一定要放置半年以上方可使用)。

11. 在光鏡下,上皮細胞通常呈“鋪路石"樣排布,細胞之間有拉絲現象(即距離較遠的細胞可以通過細長的觸手相連),細胞有成片生長的特性。而間質細胞通常呈梭形,沒有有成片生長的特性,細胞之間的聯系不緊密。但是細胞的形態特征會因為生長條件的改變而改變,如HeLa細胞是上皮細胞,但是在酸性培養條件下會變為梭形。


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